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噻唑蓝，简称MTT。细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜 (Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜 (DMSO)能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。MTT有致癌性，实验时需做好防护。

Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测试剂。WST-8(化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐)，是一种类似于MTT的化合物，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)存在的情况下，被线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒产物(formazan)。细胞增殖越多越快，颜色越深;细胞毒性越大，则颜色越浅，对于同样的细胞，颜色的深浅与活细胞的数量成正比，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

CCK-8的优点

1) 产生的甲瓒产物是水溶性的，无需换液，适合悬浮细胞;

2) 不需要放射性同位素和有机溶剂，对细胞的毒性小;

3) CCK-8细胞活性检测试剂即开即用;

4) 灵敏度高，线性范围宽，数据可靠，重现性好;

5) 操作简便，省时省力;

6) 适合于高通量药物筛选。

CCK-8的缺点

1) 与MTT法相比，CCK-8试剂的价格比较贵

2) CCK-8试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近，操作过程中容易漏加或多加。

CCK-8注意事项

1) 培养板周围一圈孔培养液容易挥发，为减少误差，建议培养板周围的四边每孔只加培养基;

2) 建议采用多通道移液器，减少平行孔间的误差，加试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，干扰 OD 值;

3) 接种细胞数：标准96孔板，贴壁细胞的最小接种量为1000个/孔 (100μL培养基)。若为白细胞，接种量不低于2500个/孔 (100μL培养基)。如若使用24孔板或6孔板，应预先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液;

4) CCK-8 对细胞的毒性非常低，其他的实验，例如中性红法或结晶紫法 ，也可在 CCK-8 法检测完后继续进行;

5) CCK-8 反应时间：悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色，因此需要增加细胞数量并延长CCK-8反应时间。

6) 如果细胞培养时间较长导致培养基颜色发生了变化，应洗涤细胞更换培养基后再加CCK-8进行检测。

7) 空白对照：在不含细胞的培养基中加入CCK-8，测定450nm的吸光度即为空白对照。在细胞毒性实验中，还应考虑药物的吸收，可在加入药物的培养基中加入CCK-8，测定450nm的吸光度作为空白对照。

8) 测定波长：如果样品为高浑浊度的细胞悬液，建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。

9) 加 CCK-8 试剂时速度要快，减少试剂在移液器上的残留，加入 CCK-8 试剂后轻轻震培养板，为了避免加样时由于 CCK-8 残留在枪头上所带来的误差，可以在加样前用培养稀释 CCK-8 试剂并混匀后加样。

10) CCK-8 反复冻融会增加背景值，干扰实验测定。

11) 如果待测物质有氧化还原性，可在加 CCK-8 之前更换新鲜的培养基，去掉待测物质的影响。