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免疫组化技术的核心原理是抗原与抗体的特异性结合。抗体是一种免疫系统产生的特殊分子,能识别和结合特定的目标分子,如细菌、病毒或肿瘤细胞等。免疫组化技术利用了抗体的这种特性,通过标记荧光染料或酶标记等,将目标分子显示出来。免疫组化的结果通常以染色或未染色的形式表示,可以帮助医生判断疾病的状态和类型。
免疫组化实验步骤
1.样品制备:包括细胞样本和组织样本的采集和处理,确保抗原的展示和定位。
2.固定:使用固定液(如甲醛、醇、醛等)终止和抑制外源性和内源性酶活性,保持组织细胞的固有形态和抗原结构。
3.组织切片:将固定后的组织切成薄片,以便于后续的染色和观察。
4.石蜡包埋:将切片进行脱水、透明化、浸渍和包埋,以便于长期保存和切片。
5.灭活和阻断:消除内源性酶的活性,阻止抗体与组织中的非目标抗原结合。
6.抗原修复:通过加热或酶消化等方法恢复抗原的活性,使其能够与抗体结合。
7.检测:使用一抗和二抗进行染色,通过显色剂显示抗原的位置和数量。
8.显微镜镜检和图像采集分析:观察染色结果,并进行定量分析。
免疫组化实验应用领域
1.疾病诊断:通过检测组织原位表达的肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等抗原性物质,帮助诊断疾病。
2.肿瘤研究:检测肿瘤细胞中的特定抗原,评估肿瘤的类型、分级和预后。
3.感染性疾病研究:检测病原体在宿主组织中的分布和数量,了解感染过程。
4.细胞生物学研究:研究细胞内特定蛋白质的分布和功能。
5.药物开发:筛选和验证药物靶点,评估药物疗效和毒性。