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免疫共沉淀的基本原理是利用特异性抗体与目标蛋白结合,形成免疫复合物,并通过与抗体连接的亲和介质(如蛋白A/G琼脂糖珠)进行富集。在非变性条件下裂解细胞,可以保留蛋白质之间的天然相互作用。通过洗涤去除非特异性结合的蛋白质,最后通过洗脱和分析,如免疫印迹(Western blot)或质谱分析,来鉴定和定量目标蛋白及其相互作用伙伴。
实验流程
提取总蛋白——抗体孵育——收集并裂解细胞——加入蛋白A/G孵育——WB检测
样品要求
1) 组织样品:质量≥0.50g,植物组织≥2g;
2) 细胞样品:细胞数≥2×107 细胞数/样品;
3) 蛋白样品:裂解样品总蛋白量>2mL/样品。
样品信息
客户提供目的蛋白和互作蛋白的详细信息,包括蛋白种属、大小、参考文献等。
报告交付
实验所需试剂、仪器,试验方法,实验结果等。
免疫共沉淀实验应用
免疫共沉淀技术广泛应用于蛋白质相互作用网络的研究、蛋白质纯化和鉴定、药物研发等领域。通过Co-IP实验,可以鉴定目标蛋白与其他蛋白之间的相互作用,揭示蛋白质的功能和参与的信号通路,为生物医药研究提供重要信息。
免疫共沉淀实验的优势
1.可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。
2.相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态。