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免疫共沉淀实验

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,简称Co-IP)是一种基于抗体与抗原之间特异性结合原理,用于研究蛋白质相互作用的经典技术。通过这种技术,可以从复杂的细胞裂解液中特异性地沉淀出目标蛋白及其相互作用伙伴,进而通过一系列的生化方法进行鉴定和分析,以揭示蛋白质之间的相互作用关系。

免疫共沉淀的基本原理是利用特异性抗体与目标蛋白结合,形成免疫复合物,并通过与抗体连接的亲和介质(如蛋白A/G琼脂糖珠)进行富集。在非变性条件下裂解细胞,可以保留蛋白质之间的天然相互作用。通过洗涤去除非特异性结合的蛋白质,最后通过洗脱和分析,如免疫印迹(Western blot)或质谱分析,来鉴定和定量目标蛋白及其相互作用伙伴。

实验流程

提取总蛋白——抗体孵育——收集并裂解细胞——加入蛋白A/G孵育——WB检测

样品要求

1) 组织样品:质量≥0.50g,植物组织≥2g;

2) 细胞样品:细胞数≥2×107 细胞数/样品;

3) 蛋白样品:裂解样品总蛋白量>2mL/样品。

样品信息

客户提供目的蛋白和互作蛋白的详细信息,包括蛋白种属、大小、参考文献等。

报告交付

实验所需试剂、仪器,试验方法,实验结果等。

免疫共沉淀实验应用

免疫共沉淀技术广泛应用于蛋白质相互作用网络的研究、蛋白质纯化和鉴定、药物研发等领域。通过Co-IP实验,可以鉴定目标蛋白与其他蛋白之间的相互作用,揭示蛋白质的功能和参与的信号通路,为生物医药研究提供重要信息。

免疫共沉淀实验的优势

1.可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

2.相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态。

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