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在无菌环境下,从活体机体内取出某种组织细胞(视不同实验目的而定),经过一定的处理(如消化分散细胞、梯度密度分离等)后接入培养器血中,自活体机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。
实验流程
1) 器官或组织中的细胞
机体消毒→用灭菌的手术器械分离组织或器官→将器官或组织机械分离成小块→加入完全培养液研磨或用胰蛋白酶消化器官/组织→用细胞筛过滤细胞悬液→梯度密度离心→取出需要的细胞层用完全培养液重悬→细胞计数→根据实验需要将一定的细胞量传代到新的培养瓶或培养板→放入37℃培养箱培养
2) 体液中的悬浮细胞
用完全培养液灌注→数分钟后抽出培养基至无菌离心管→200g~300g离心,弃去旧培养液→加入红细胞裂解液冰上裂解10min→加入完全培养液中止红细胞裂解作用,离心弃液体→完全培养液重悬细胞悬液→离心弃液体, 用完全培养液重悬细胞→细胞计数→根据实验需要将一定的细胞量传代到新的培养瓶或培养板→放入37℃培养箱培养
样品要求
动物鲜活个体、器官或组织
样品信息
动物种类、数量、细胞类型、培养基类型、参考方法等。
报告交付
实验所需试剂、仪器、实验方法等