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Western Blot即蛋白质免疫印迹法是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶转移到固相支持物PVDF或NC膜膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测,可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。
实验流程
细胞或组织样品蛋白提取——蛋白质检、定量及变性——SDS-PAGE凝胶电泳——转膜——封闭——抗体孵育——ECL化学发光检测——数据分析
WB蛋白免疫印迹实验应用
WB蛋白免疫印迹技术广泛应用于研究基因在蛋白质水平的表达、检测抗体活性以及早期诊断疾病等多个领域。它可以用于从蛋白质混合物中检出目标蛋白质,定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况,以及用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析
样品要求
1) 细胞样品:细胞数≥106;
2) 组织样品:总量≥0.50;
3) 蛋白样品:裂解样品总蛋白量≥500μg/样品,浓度≥2μg/μL。
样品信息
样品种类、样品种属、目的蛋白名称及预计分子量大小、一抗是否提供(或指定品牌由公司购买)。
报告交付
实验所需试剂、仪器,试验方法,实验结果等
应用领域
1. 蛋白质表达分析:检测特定蛋白质在不同组织、细胞或不同处理条件下的表达水平变化。
2. 蛋白质定位研究:确定蛋白质在细胞内的定位。
3. 蛋白质相互作用研究:通过共免疫沉淀结合 Western Blot 检测蛋白质之间的相互作用。
4. 疾病诊断和研究:在医学领域,用于检测疾病相关蛋白质的表达变化,为疾病的诊断和研究提供依据。