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蛋白表达与纯化

蛋白表达是指在实验室条件下,通过遗传工程手段将特定的蛋白质基因导入到宿主细胞中,使其在宿主细胞内得到合成的过程。蛋白纯化则是指从复杂的混合物中分离出目标蛋白的技术,通常涉及多种生物化学和分子生物学方法。

蛋白表达是指在实验室条件下,通过遗传工程手段将特定的蛋白质基因导入到宿主细胞中,使其在宿主细胞内得到合成的过程。蛋白纯化则是指从复杂的混合物中分离出目标蛋白的技术,通常涉及多种生物化学和分子生物学方法。

实验流程

质粒构建——蛋白表达——蛋白纯化——成果交付。

样品信息

目的蛋白信息或基因序列,质粒。

报告交付

传化后蛋白、蛋白表达结题报告。

蛋白表达实验常用方法

原核表达系统:如大肠杆菌(E. coli),适用于快速生产大量蛋白质,成本低廉,但可能需要后续的折叠和重组。

真核表达系统:如昆虫细胞、哺乳动物细胞,蛋白质的折叠和后修饰更为接近天然状态,但成本较高,表达速度相对较慢。

蛋白纯化实验常用方法

1.亲和层析:利用蛋白质与其特定配体之间的高亲和力进行分离,如使用金属离子亲和层析纯化带有His-tag的蛋白质。

2.凝胶过滤层析:根据蛋白质的大小进行分离,大分子蛋白质先于小分子蛋白质流出。

3.离子交换层析:根据蛋白质的电荷性质进行分离,正电荷蛋白质先于负电荷蛋白质流出。

4.疏水层析:根据蛋白质的疏水性进行分离,疏水性强的蛋白质先于疏水性弱的蛋白质流出。

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