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ELISA的基本原理是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体(通常是聚苯乙烯微量反应板)表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行。通过洗涤法将液相中的游离成分洗除,然后加入底物溶液,底物在酶的作用下转化为有色产物,通过测量产物的颜色深浅来定量分析样品中的抗原或抗体的含量。
实验流程
1.包被:将特定的抗体或抗原固定在固相载体上。
2.封闭:使用封闭液处理未被抗体或抗原占据的位置,以防止非特异性结合。
3.加样:加入待测样品,使其与固相载体上的抗体或抗原反应。
4.洗涤:去除未结合的物质。
5.显色:加入酶底物,酶催化底物产生颜色反应。
6.终止:加入终止液停止反应。
7.读数:使用酶标测定仪测定光密度值,根据标准曲线计算样品中的抗原或抗体含量。
ELISA实验应用
ELISA具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点,因此在医学、生物化学、环境监测等领域得到了广泛应用。
ELISA可以用于检测多种细菌和病毒等病原体,也可以用于检测特定的蛋白质、激素、药物等生物活性物质。在医学领域,ELISA常用于传染病的诊断、肿瘤标志物的检测、激素水平的测定等。在动物检疫方面,ELISA也被广泛应用于检测各种动物疾病的病原体。
样品要求
1) 细胞样品:细胞数≥106;
2) 血清样品:体积≥100μL;
3) 尿液、细胞培养液等液体样本:体积≥100μL;
4) 组织样品:总量≥0.1g;
报告交付
实验所需试剂、仪器,试验方法,实验结果等