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生化检测和ELISA实验中不同样本的处理方法
发布时间:2023-03-18 浏览次数:

生化酶活检测或ELISA检测的样本涉及多种类型如动物组织、植物组织、血清、血浆、尿液、细胞培养上清等。不同样本前期处理也不一样,正确处理样本是保证检测的精准性的基石。

1. 动物组织样本

1) 将组织样本用PBS冲洗,洗去组织表面残留的血液或杂质,吸水纸擦干。

2) 将组织块称重,记录后剪碎,碎块应尽量小,便于更充分的进行匀浆。

3) 通常按组织重量:PBS体积=1:9的比例加入预冷的PBS(临用前加入蛋白酶抑制剂),在冰上或冰浴中进行匀浆。(具体体积可根据实验需要适当调整,检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数)。

4) 4℃,2000-5000rpm 离心5-10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。

2. 血清

用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本,采血过程中应避免溶血和细菌污染,将试管或离心管室温倾斜放置2h或4℃一个晚上,使血清析出。4℃,3500rpm离心15min,取上清。建议将血清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。

3. 血浆

用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本,标本采集后30min内4℃1000×g离心15min,取上清即血浆。将上清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。常用的抗凝剂为EDTA、肝素钠和枸橼酸钠等,检测时还应仔细阅读试剂盒说明书,检查试剂盒是否对抗凝剂有特殊要求。

4. 细胞培养上清

离心管收取细胞培养上清样品,1000×g离心20min,除去细胞碎片及杂质,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。

5. 细胞裂解液

1) 吸去培养板内的培养基,用胰酶消化细胞,加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。

2) 离心管收取细胞悬液,1000×g离心10min,弃上清,用预冷的PBS冲洗3次离心后弃上清。

3) 加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。

4) 将样品放入-80℃,使样品冷冻,再放室温解冻样品,反复冻融几次,使细胞充分裂解。或将样品进行超声破碎,使其裂解。

5) 4℃,10000×g 离心10min,除去细胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。

6. 尿液、唾液等其他液体生物样本

离心机1000×g离心20min,取上清即可检测。

为了保证检测的准确性,保存于-20℃或-80℃的样本最好在1-6个月内检测;4℃保存的样本应在1周内进行检测。