新闻资讯

抑菌圈法又叫扩散法，是利用待测药物在琼脂平板中扩散使其周围的细菌生长受到抑制而形成透明圈，即抑菌圈，根据抑菌圈大小判定待测药物抑菌效价的一种方法。抑菌圈法操作便捷、简单易行、成本低廉、结果准确可靠，是抑菌试验的经典方法，被广泛使用。

抑菌圈研究法中使用最多的主要有K-B法(Kirby-Bauer test)、牛津杯法和打孔法三种。

K-B法即滤纸片法，选用质地均匀的滤纸，用打孔机打成直径相同的圆片，灭菌后烘干，浸泡于待测样品中，然后置于试验平板中培养一段时间后测定抑菌圈大小的一种方法。

打孔法，是指用已灭菌的打孔器或钢管在试验平板上打孔，往孔中注入一定量的待测样品，培养一段时间后测定抑菌圈大小的一种方法。

牛津杯法抑菌原理是在涂有病原指示菌的平板上加上放有抑菌物质的牛津杯共同培养，一方面指示菌开始生长繁殖，另一方面抑菌物质呈球面扩散，离杯越近抑菌物质浓度越大，离杯越远抑菌物质浓度越小，在牛津杯周围抑菌浓度范围内指示菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。

1. 主要器皿及用品

培养皿(直径90 mm)、牛津杯(内径6 mm)、三角瓶(250 mL)。

2. 培养基

液体培养基：蛋白胨10 g/L，酵母粉5 g/L，NaCl10 g/L，pH 7.8。

平板培养基：蛋白胨10 g/L，酵母粉5 g/L，NaCl10 g/L，琼脂粉20 g/L，pH 7.8。

3. 方法

菌种的活化及菌液的制备：将冷冻保存的菌种划线接种至平板培养基，37℃培养24 h;挑单菌落接种至100 mL液体培养基，37℃、200 r/min摇床培养过夜，菌液备用。

4. 试验平板的制备：

涂布平板法：先往已灭菌的平板中倾注20 mL左右平板培养基，水平静置凝固，接种0.1 mL菌液，涂布均匀后备用。

倾注平板法：先往已灭菌的平板中接种1 mL菌液，然后倾注约20 mL已冷却至50 ℃左右的平板培养基，混合均匀，水平静置凝固后备用。

预加菌液倾注平板法：往已冷却至50 ℃左右的平板培养基中注入一定量的菌液，混合均匀，倾注平板(约20 mL/平板)，水平静置凝固后备用。

5. 流行的试验平板制备方法主要有3个：①涂布平板法、②倾注平板和③预加菌液倾注平板法。

方法①获得的试验平板其抑菌圈清晰，但菌体生长不够均匀，重复性较差，效果一般;方法②和方法③获得的试验平板其抑菌圈清晰，菌体生长均匀，重复性好，效果好。

综合试验过程的各步骤细节，方法①导致菌体生长不均匀的原因可能是涂布操作不能很好地保证菌液平均分布于平板的各个角落，且重复性不够好;方法②和方法③的效果均较好，但方法③获得的试验平板质量会更高，原因是在制备平板前把菌液加进培养基中，摇均匀后再倾注平板，保证了每个平板中菌的浓度是一样的，这一点是方法②无法做到的，从而保证了试验的一致性。

6. 注意事项

当抑菌剂含量一定时，抑菌圈的大小跟菌体浓度有很大关系，如果菌体浓度过大，会拮抗抑菌剂的作用，导致抑菌圈偏小。因此，对试验平板中的菌体数进行梯度浓度试验，可确定实验最适合的活菌浓度。