发布时间：2023-04-25 浏览次数：
【汇总】细胞培养常见问题
细胞培养最看重的就是无菌操作，无菌操作是细胞培养是否成功的关键点。
1. 细胞生长缓慢常见原因：
1) 更换了血清或者培养基，细胞需要一段时间适应一下;
2) 由于细胞的特殊种类，培养基中缺少某些生长因子;
3) 培养基中有少量真菌或者细菌污染;
4) 传代的时候细胞密度过低;
5) 细胞状态老化;
6) 支原体污染。
2. 解决上述问题的方法：
1) 如果实验室没有某种细胞最适宜的培养基，可以先用原培养条件冻存一些，然后逐渐增加新的培养基比例，25%、50%、75%到100%，传代3-5次后，让细胞慢慢适应;
2) 判断是不是培养基发生污染，可以先不加抗生素，观察细胞状态;
3) 增加细胞的接种密度;
4) 发现细胞老化的时候，及时更换新的细胞;
5) 如果怀疑是支原体污染，一定要隔离疑似污染的培养皿，及时清洁消毒孵箱;
3. 造成细胞死亡的原因：
1) 细胞消化过度;
2) 没有及时换液，营养成分消耗殆尽;
3) 如果前一天细胞的状态很好，换液之后就全死了，应该考虑是否是培养基或者血清的问题。
4. 如何判定细胞是否发生支原体污染：可以选用直接培养法、荧光染色或PCR方法检测，比较常用的是PCR。当细胞发生支原体污染时，原则上是能够去除支原体的，但是整个过程耗时耗力，还要考验个人操作能力。所以如果不是处于细胞存量很少的情况下，建议发现污染时立刻弃掉，重新培养。
5. 每个星期都要更换孵箱底盘中的水(紫外照射后超纯水);每两周消毒一次孵箱：75%酒精擦拭一遍后，再用0.1%新洁尔灭擦拭一遍(都用超纯水配制);可以在孵箱底部放一个烧杯，里面放入饱和硫酸铜，可以抑制霉菌生长。