发布时间：2023-06-28 浏览次数：
细胞增殖检测CCK8和MTT的区别
CCK8实验原理：
细胞活力检测试剂盒(CCK-8) 可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。
其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】。
在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。
生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法,可替代传统的MTT法。
MTT实验原理：
MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，是一种黄颜色的染料。活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT，同时在细胞色素C的作用下，生成蓝色（或蓝紫色）不溶于水的甲臜（Formazan），甲臜的多少可以用酶标仪在570nm 处进行测定。在通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比，因此可根据光密度OD值推测出活细胞的数目。由于死细胞中不含琥珀酸脱氢酶，因此加入MTT 不会有反应。
CCK8法的优缺点：
优点：
灵敏度高：CCK-8法可以检测低浓度的细胞生长情况，并能够测定细胞对于外界刺激的反应，如药物治疗的效果。
简便快速：CCK-8法操作简单，不需要复杂的设备和技术，通常只需一些基本的实验器材即可完成实验。此外，CCK-8法的反应时间相对较短。
高通量性：CCK-8法适合进行大规模细胞增殖或细胞毒性筛选实验，可以同时处理多个样品，提高工作效率。
低毒性：与其他细胞增殖试剂相比，CCK-8试剂的毒性较低，对细胞影响较小，有助于准确评估细胞的活力和代谢状态。
缺点：
不能全面评估细胞功能：CCK-8法只能评估细胞数量的变化，不能提供关于细胞功能和形态学特征等更详细的信息。
可能存在干扰：某些试剂、化合物或操作条件可能对CCK-8反应产生干扰，导致结果的准确性受到影响。
依赖于代谢活性：CCK-8法基于细胞的代谢活性来评估细胞数量，因此在一些特殊情况下（如休眠状态或代谢异常）可能无法准确测定细胞增殖或毒性。
MTT法的优缺点：
优点：
可靠性高：MTT法在评估细胞生存与代谢活性方面具有较高的可靠性，广泛应用于细胞毒性、药物筛选、细胞增殖等研究领域。
应用范围广：MTT法适用于多种细胞类型和不同培养条件下的细胞测定，包括悬浮细胞和贴壁细胞，可以满足细胞增殖和细胞毒性实验的需求。
实验操作简单：MTT法操作相对简单，只需要将MTT试剂加入培养细胞中并进行一系列的离心、洗涤及显色步骤即可得到结果。
高通量性：MTT法可以同时处理多个样品，适用于大规模实验和高通量筛选。
缺点：
无法区分细胞数量变化和代谢活性变化：MTT法不能直接区分细胞数量的增加还是细胞代谢活性的改变，因此对于一些特殊情况下的细胞（如休眠状态或代谢异常），结果可能不够准确。
需要细胞溶解：MTT法需要通过将细胞溶解以释放内部产生的可溶性紫色产物，因此会破坏细胞结构和形态，无法用于其他细胞进一步的观察或分析。
可能存在干扰：某些试剂、化合物或操作条件可能对MTT反应产生干扰，干扰物的存在可能导致结果误差，需要进行适当的对照和校正。
CCK8法的实验用途：
1.细胞增殖测定：细胞增殖实验在很多领域都会用到，比如肿瘤相关、损伤后修复等。
2.药物筛选：在测定一个药物的毒性和安全有效浓度时，经常会用到CCK-8。
3.细胞毒性测定：这个可以和各个处理因素对细胞活性和增殖的影响，比如在UV、低氧或者什么化学物品对细胞的影响上。
4.肿瘤药敏试验：这个是用的比较广的。
5.微生物对细胞的毒性或增殖的实验。
MTT实验用途：
1.药物(也包括其他处理方式如放射线照射)对体外培养的细胞毒性的测定;
2.细胞增殖及细胞活性测定。