新闻资讯

 

样本量要求：200mg/sample。

1.首先准备好用于包装样本的铝箔或冷冻保存管，并且用油性记号笔在铝箔或冻存管外表多处写明样本编号；

2.准确切除所需组织后，在生理盐水或 PBS 中迅速漂洗样本，以去除血渍和污物；并将组织切割成小块，用镊子夹住样本，立即投入液氮冷冻；

3.用准备好的铝箔或冷冻保存管装载包裹组织，迅速投入液氮或转入-80℃ 冰箱保存样本；

4.填写样本登记单，写明样本名称、组织类型、编号、取样日期、样本处理过程等情况；

5.组织的量为 200mg/sample，保留备份，干冰低温寄送，避免反复冻融。

 

 

样本量要求：200mg/sample。

首先配制浓度为 100mg/mL  的叠氮化钠（用双蒸水溶解），待新鲜粪便或肠道内容物样本收集好后，按照 2μL/g 样本的比例添加叠氮化钠，混匀后分装样本至 200mg/管，然后立即用液氮速冻处理 15min，保存至-80℃冰箱，足量干冰低温运送。
 

注意事项：

1.叠氮化钠的作用是防腐杀菌，有毒，请万分小心。

2.由于粪便/肠道内容物中有非常多的微生物，微生物代谢速度非常快，所以反复冻融会对代谢水平有非常大影响。强烈建议样本收集后，按照200mg/sample 进行分装冻存。

 

 

样本量要求：500 ul/例,原则上可以多取一点。样本收集步骤：

1.采集 1ml 腹水样本于离心管中，1900g 室温离心 15min。

2.转移上清至新的离心管中，再 16000g 离心 30min。

3.取上清分装到 1.5ml 离心管中，-80  度冻存，干冰寄送。

 

 

样本量要求：1ml/ sample，原则上可以多取一点。样本收集步骤：

晨起中段尿（临床）或晨间 1 小时尿（动物）直接分装到离心管中，每管1ml，添加质量体积为 0.5/1000（w/v、kg/L）的叠氮化钠（P.S.如若叠氮化钠获取困难可用 1000rpm，4  度离心 5  分钟，0.22μm  滤膜过滤方法代替），-80  度冻存寄送。
 

注意事项：

1.动物 1 小时尿量不够，可分多次收集，如果需要收取 24h 尿液，请使用带有低温

2.装置的代谢笼收取，并添加叠氮化钠。

3.叠氮化钠的作用是防腐杀菌，有毒，请万分小心。

 

 

样本量要求：200 微升/例,原则上可以多取一点。样本收集步骤：

1.采集 1ml 瘤胃液样本于离心管中，6000g 室温离心 15min。

2.收集上清液，用一次性 0.22um 无菌滤膜过滤。

3.收集滤液分装到 1.5ml 离心管中，-80  度冻存，干冰寄送。

 

 

样品量要求：200ul/sample。

血清样本收集步骤：

血液收集在离心管中 37℃（或室温）静置 1h 进行凝固分层。然后 3000rpm 室温离心 10 分钟，取上清转至干净的离心管中。再 12000rpm 4℃离心 10  分钟， 取上清分装到 1.5mL 离心管中，每管 0.2ml，-80 度冻存。足量干冰寄送。
 

注意事项：

1.取血时如用酒精消毒，请擦干擦拭部位，待酒精完全挥发后再取样。

2.取血时如用麻醉剂，建议用异氟醚，防止在 NMR 血清谱图中出现干扰峰。

3.血清参考产率：30%~50%（例如：1mL 全血大约能得 0.3~0.5mL 血清）。

4.采全血时如使用真空采血管，请务必使用无预加抗凝剂的凝血管（帽盖为红色）。

5.强烈推荐尽量多的收集样本并分装冻存（这样可以用来做很多实验，且避免反复冻融）。

 

血浆样本类型
 

应使用肝素钠抗凝管（真空采血管帽盖为绿色）或 EDTA 抗凝管（真空采血管帽盖为紫色）采集全血，并尽快进行血浆分离：3000rpm 室温离心 10 分钟（血样采集后室温放置需在 1h 之内进行离心；血样采集后冰上放置需在 2h 内进行离心），取上层，0.2mL/管分装至 1.5mL 离心管中。-80 度冻存。足量干冰寄送。
 

注意事项：
 

1.对于抗凝管的选择：代谢组学实验检测推荐使用肝素钠抗凝管（因为柠檬酸是 TCA 循环中的重要物质，使用柠檬酸钠抗凝剂的话会引入外源污染。而 EDTA 会影响 NMR 采谱。但肝素钠会对 RNA 相关实验有负面作用，主要是因为会抑制反转录酶活性。请根据自身具体情况选用合适的抗凝管）。
 

2.最后分装保存推荐使用 1.5mL 离心管，因为螺口冻存管管帽内有一个橡胶垫圈，目的是为了密封。但是长期在-80℃/干冰低温下，橡胶圈会变硬脆，易脱落，导致密封不严，样本泄露。
 

3.血浆参考产率：≈50%（例如：1mL 全血大约能得 0.5mL 血浆）。

备注：

1.采集到的血清、血浆样本颜色应该是淡黄色透明或者半透明液体，如果发现样本中是红色，说明在样本采集过程中出现了溶血现象。溶血后会导致样本的代谢谱发生很大的变化，所以出现溶血的样本建议重新制备。

2.确保样本收集过程的一致性，如血清样本要尽可能保证所有样品凝血时间的一致性。

3.样本分装后必须确保离心管盖紧且样本编号标记清晰，干冰寄送时请确保干冰量足且样本埋藏于干冰深处，泡沫箱密封严实且不易破损（建议在泡沫箱外面套层纸箱）。

 

 

样品量要求：200ul/sample。

样本收集步骤：

取样本分装到 1.5mL 离心管中，每管 0.2ml，液氮速冻，-80 度冻存。足量干冰寄送。
 

注意事项：

1.取血时如用酒精消毒，请擦干擦拭部位，待酒精完全挥发后再取样。

2.取血时如用麻醉剂，建议用异氟醚，防止在 NMR 血清谱图中出现干扰峰。

3.强烈推荐尽量多的收集样本并分装冻存（这样可以用来做很多实验，且避免反复冻融）。

 

 

样品量要求： 200μL/sample，原则上可以多取一点

样本收集步骤：

所有动物都是在相同的管理条件下饲养的，并得到相同的营养，收集 1mL 的精液样本；采样后立即 4℃，3000rpm，离心 10min 分装上清液至 1.5mL 离心管中，液氮淬灭，-80℃低温保存，足量，干冰寄送。

 

 

样品量要求：肺泡灌洗液 200ul/sample， 样本取样时原则上可以多取一点。

样本收集参考步骤：

1.采集 1ml 肺泡灌洗液样本于离心管中，4℃下 6000g 离心 10min；

2.收集上清液，分装到 1.5ml 离心管中，放入液氮 30s； 3. -80℃冻存。
 

注意事项：

1.样本收集时仔细操作，避免污染；

2.全程在低温下快速进行；

3.将样本分装以便多次实验；
 

10 卵泡液
 

样本量要求：200ul/sample。

样本收集步骤：

将收集到的卵泡液立即 3000g 4℃离心 20 分钟，取上清分装到 1.5mL 离心管中，每管 0.2mL，-80 度冻存。足量干冰寄送。
 

注意事项：

1.样本收集时仔细操作，避免血液污染。

2.取样时如用麻醉剂，建议用异氟醚，防止在 NMR 血清谱图中出现干扰峰。

3.强烈推荐尽量多的收集样本并分装冻存（这样可以用来做很多实验，且避免反复冻融）。
 

11 脑脊液
 

样本量要求：200ul/sample。

用不含任何添加剂的聚丙烯 EP 管收集脑脊液后，立即在 4℃ 3000rpm 下离心 10min， 收集上清至无菌 EP 管中，200-500ul/管。-80℃冻存。足量干冰运输。
 

注意事项：

1.样本需及时冷冻，且避免反复冻融；

2.取样后若样本不浑浊的情况下也可不进行离心，立即-80℃冻存。

 

 

样本量要求：200ul/sample。

收集全唾液有不同的方法。无论采用何种方法，均应指导受试者在采集试验前至少 1h 内避免进食、饮水、吸烟或使用口腔卫生产品。用去离子水彻底漱口，并排空口腔唾液。受试者应舒适坐姿，睁眼，头部略微向前倾，并指导受试者休息 5  min（采集未刺激的唾液），尽量减少口面部运动。收集 5 分钟。

以下是采集全唾液最常用的三种方法：

1.引流法：放松，将唾液从下唇滴入装有漏斗的 50ml 离心管中；

2.吐痰法：让唾液积聚在口腔底部，受试者每 60 秒将唾液吐入 50ml 离心管中（提醒受试者不要咳出黏液）；

3.抽吸法：通过唾液抽吸器将口底的唾液持续抽吸到离心管中； 随后将唾液标本 4℃，2600g  离心 15 min。

 

 

样本收集步骤：

1.常规无菌生理盐水消毒外阴，用扩阴器扩张阴道；

2.用无菌棉拭子拭取宫颈口或宫颈后穹窿的分泌物，紧贴阴道壁，轻微 360° 旋转 5 次，放入 15ml 无菌聚丙烯锥管中，液氮淬灭，-80 ℃冰箱保 存， 或者迅速直接存放在-80 ℃冰箱中。
 

注意事项：

记录阴道检查结果及 pH 检测结果，且样本采集前 24～48h 禁欲、禁盆浴、禁阴道灌洗及局部上药。

 

 

样本量要求：1mL/ sample

样本收集步骤：

1.将煮好的汤混合物用纱布过滤；

2.滤液 4℃，11,000 g  下离心 20  分钟，取出上清液；

3.再用 0.22μm 超滤膜再次过滤上清液；

4.过滤好的液体收集分装到 1.5mL 离心管中，每管 1mL，液氮淬灭；
5. -80℃保存；

6. 送样的时候干冰运输。

备注：

由于肉汤代谢物多少与汤的浓稠度有关系，所以建议样本间条件均保持一致， 肉汤样本量好取的情况下，分装保存，多提供几管，用于备用。

 

 

样本量要求：1ml/ sample，原则上可以多取一点。

清晨痰量多，含菌量亦大，可先用洁口液，再用凉开水或生理盐水漱口，以除去口腔中细菌，深吸气后用力咳出 1-2 口痰于广口无菌瓶中，痰量极少可用45℃10%氯化钠溶液雾化吸入导痰。
 

液化方法：

1.用注射器将痰液来回抽提并打出，使得痰液混匀。-80 度冻存寄送。

2.Saccomanno 液（每 50 毫升固定液中含 50%乙醇 48 mL, 2%聚乙二醇 1 mL、0.3%利福平 1 mL)、二硫苏糖醇（DTT）液（0.1 g DTT、0.78 g 氯化钠、0.02 g 氯化钾、0.112 g 磷酸二氢钠、0.02 g 磷酸二氢钾, 加水至2 L,  使 DTT 浓度为 0.005%）等体积混合, 1~2  倍体积加入到痰液中, 振摇液化 30 min； -80  度冻存寄送。
 

注意事项：

采样前 12h 禁食。

 

 

样品量要求：1*107cell/sample，提供 2 份样本。

悬浮细胞收集方法：

1.直接从培养基中取出细胞悬浊液，装入 15ml 离心管；

2.1200rpm 4℃离心 5min，离心后去除上清，沉淀为细胞；

3.然后向细胞中加入 1ml PBS，混匀后转入 1.5ml 的离心管中。900rpm 4℃离心 3min，将上清去除；

4.重复③三遍（目的是用 PBS  清洗细胞 3  次）；

5.然后放到液氮中浸泡≥3min 淬灭。放入-80℃冰箱保存，以备分析用。

6.最终的细胞是在 1.5mL 的离心管中，且没有液体。

 

 

贴壁细胞收集方法：

1.先用胰酶消化或用细胞铲铲掉后，再装入 15ml  离心管；

2.1200rpm 4℃离心 5min，离心后去除上清，沉淀为细胞；

3.然后向细胞中加入 1ml PBS，混匀后转入 1.5ml 的离心管中，再 900rpm 4℃离心 3min，将上清去除；

4.重复③三次（目的是用 PBS  清洗细胞）；

5.然后放到液氮中浸泡≥3min 淬灭，再放入-80℃冰箱保存，以备分析用；

6.所以，最终的细胞是在 1.5mL 的离心管中，且没有液体。
 

17 线虫
 

样本收集步骤：

1.将线虫在含有大肠杆菌（strain HB101  或 OP50，6.9 X 109 CFU/mL）的NGM 培养基（6cm  或 10cm 平板）下，22°C  进行培养。

2.培养到预期的生长阶段后使用 10μm 孔过滤器过滤，分离线虫和菌体。

3.收集得到的线虫用 1.5L M9 buffer 冲洗，震荡 20min 以使其排空其肠道内容物。

4.将含有线虫的 M9 buffer 分装至 500ml 瓶子中，室温下约 1100g 离心4min。

5.吸出上清液，将得到的沉淀物用 50mL M9 buffer 复溶。将剩余的悬浮液分装在 6 个 15mL  的小瓶中（即 n=6），并在室温下以 1,100×g  离心4 分钟，将上清液吸出，将沉淀物在液氮中冷冻，-80°C 冰箱保存直至实验。

NGM（nematode growth medium）培养基成分
1 000 ml 的 NGM 培养基内加有:3 g NaCl , 2. 5 g 蛋白胨,17 g 琼脂, 1 mol/ L K2HPO4 2KH2PO4 缓冲液(pH = 6. 0) 25 ml ,975 ml 蒸馏水,灭菌后加入分别抽滤除菌的 1 ml 胆 固醇溶液(5 mg/ ml 乙醇) ,1 mol/ L MgSO4 1 ml , 1 mol/ L 的CaCl2 1 ml。

M9 buffer 成分
每升缓冲液中含 15. 12 g Na2HPO4·12H2O(或 6 g Na2HPO4) ,3 g KH2PO4 ,5 g NaCl , 0. 25 g MgSO4·7H2O ,宜现用现配。

 

18 植物根系分泌物
 

样本量要求：

常规非靶：GC-MS，LC-MS 40mg（不少于 20mg） 植物广靶：LC-MS 200mg（不少于 100mg）
 

样本收集步骤：

1.取整株植物的根部，用流动的去离子水或 1×PBS 迅速清洗植物的整个根系，以除去营养液/泥土；

2.将整个根系浸入装有 20-50ml 去离子水玻璃容器中，去离子水体积取决于根系的大小，若原本种植于土壤中，容器可用铝箔覆盖以为根部创造黑暗条件；

3.将根在与植物生长相同的受控气候条件下在水中放置 2-6h，立即收集根系分泌物溶液，冷冻干燥成冻干粉，精确称量重量，保存于 1.5ml 离心管中。具体收集时间可根据冻干粉量来调节，不够的话可以适当延长时间；
4.-80℃保存，干冰运输

注意事项：

1.根部清洗需快速，并冲洗干净；

2.根系分泌物所需体积和收集时间，因植物根部分泌物量和速度不同， 需要根据最终冻干粉的量来定；

3.因粉末在寄送过程中容易分散到管壁，不好称重。冻干粉最好能准确记录重量，实验过程中直接用管中所有的干粉，这是冻干粉不足的情况下可做此操作。

 

19 植物类
 

1.叶片、茎、花

样品量要求：

GC-MS，LC-MS 实验：200mg/sample。
顶空 GC-MS 实验：2g。
 

样本收集步骤：

取整片叶片/一段茎/一朵花，用锡箔纸包裹并标记后，迅速放入液氮中冷冻处理至 少 15min。取出后迅速放入自封袋中（每组一袋），在自封袋中放入标签纸注明样本信息。迅速放入-80℃冰箱冻存。足量干冰寄送。
 

注意事项：

1.采集叶片样本时，最好在中午光照好的时间收集。

2.要根据实验设计，采集样本时保持样本一致性，尤其是同一组样本（颜色、衰老程度、叶脉占比、光照、位置等）。

3.由于锡箔纸上 marker 笔标记容易模糊，所以需要在自封袋中放入标签纸注明。
 

2.根
 

样品量要求：

GC-MS，LC-MS 实验 500mg/sample。
顶空 GC-MS 实验：3g。
 

样本收集步骤：

1.取整株植物的根部，迅速用 1×PBS 漂洗掉根上的泥土。

2.根据具体实验设计取植株根特定的部位，500 mg/sample 装入离心管中。

3.标号后迅速放入液氮中冷冻处理至少 15min。

4.-80 度冻存；足量干冰寄送。

注意事项：

1.PBS 漂洗时间要尽快；

2.由于根部组织特别脆弱，被挤压后会变成浆糊状，所以推荐保存至离心管中，而不是锡箔纸包裹。

 

3.果实、种子
 

样品量要求：

GC-MS，LC-MS 实验 200~500mg/sample。
顶空 GC-MS 实验：3g。

样本收集步骤：

1.对于含多汁、块头较大的果实（番茄、西瓜、苹果等）需要先用锋利的刀分割成“均

2.匀”合适的小块（≈200 mg/sample）分装至 2mL 离心管中，标号后迅速放入液氮中冷冻处理至少 15min。

3.对于细小的颗粒种子（拟南芥种子、谷物种子等），可以先将同一组的植株种子混匀后再分装（≈200 mg/sample）至 1.5mL 离心管中。标号后迅速放入液氮中冷冻处理至少 15min。

4.对于要求对整个果实进行提取的（整粒葡萄等,），需要把果实装在 50mL 离心管中 /自封袋中，标号后（同时放入自封袋中标签纸，注明样本信息）迅速放入液氮中冷冻处理至少 15min。
 

注意事项：

1.对于较大果实的，建议将整个果实进行研磨、冻干，对粉末进行称重分装。

2.对多汁的果实进行取样很难保持均一性（如番茄，皮、果肉、果瓤、籽的占比）， 强烈建议将整个果实进行研磨、冻干，对粉末进行称重分装。不推荐用锡箔纸包裹。