发布时间:2024-03-20 浏览次数:
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HE染色实操注意事项
1.组织固定
组织样本必须被充分固定,以防止处理过程中组织细胞的破坏。用10%缓冲福尔马林(Formalin)进行固定通常是一个比较好的选择。
2.切片制备
对于组织样本的切片厚度和形状需谨慎考虑。切片应该是均匀的,并且不能太薄或太厚。一般来说,4-5微米是一个常见的厚度。
3.pH值调节
染色时调节pH值很重要。组织切片在染色前必须在适当的缓冲液中浸泡,在染色期间pH值应始终稳定.如果组织块在福尔马林中固定时间长,组织酸化而影响细胞核着色。因此,要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min,这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳,可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
4.控制分色时间
切片染苏木精后,分色这一步是关键,应在显微镜下控制进行,一般以细胞核染色清楚(晰)而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅,应重新染色后再行分色。
5.彻底脱去酒精
组织切片需要通过一系列的酒精浓度逐渐脱水,并用透明剂如苯酚、二甲苯等进行透明化。透明化后切片会变得更加清晰,便于染色。
切片经酒精脱水后,入二甲苯时可出现白色不透明状态,此为脱水不彻底,应将切片退回无水酒精,更换酒精、二甲苯,以求彻底脱水与透明。