发布时间：2024-08-29 浏览次数：
QPCR实验技术服务
实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，简称qPCR)是一种在DNA扩增反应中加入荧光基团，以荧光信号积累实时监测每次PCR循环后产物总量，进而对待测样品中的目的序列进行定量分析的方法。qPCR的基本原理是在PCR扩增过程中，通过荧光信号的实时接收监测PCR反应进程，利用模板的循环阈值(Ct值)和起始拷贝数之间的线性关系来进行定量分析。
QPCR实验步骤
1.实验设计：包括选择合适的引物、确定扩增体系和循环条件，以及设计实验组和对照组。
2.RNA提取与cDNA合成：从样本中提取RNA，并通过逆转录酶合成cDNA。
3.qPCR反应混合物的准备：包括模板cDNA、引物、荧光染料或探针、PCR缓冲液、dNTPs、Taq聚合酶等。
4.qPCR实验操作：在实时荧光定量PCR仪器上进行PCR扩增，仪器会实时监测并记录荧光信号的变化。
5.数据分析：通过分析扩增曲线和Ct值来计算目标基因的相对或绝对定量。
QPCR实验注意事项
1.确保使用的引物具有良好的特异性，避免非特异性扩增。
2.优化PCR反应条件，包括退火温度、延伸时间和循环次数。
3.进行阴性对照和阳性对照实验，以确保实验结果的准确性。
4.分析熔解曲线以评估扩增产物的特异性。
5.数据分析时考虑扩增效率和参考基因的稳定性。
在进行qPCR实验时，应参考最新的实验指南和最佳实践，以确保实验的成功和结果的可靠性。