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一、物理转染法
1.电穿孔法
原理:利用高脉冲电压破坏细胞膜电位,瞬时提高细胞膜的通透性,形成膜上小孔,从而促使DNA分子进入细胞内。
优点:适用于所有细胞类型的瞬时和稳定转染,转染效率高。
缺点:细胞致死率高,DNA和细胞用量大,需根据不同细胞类型优化实验条件。
2.显微注射法
原理:用显微操作将DNA直接注入靶细胞核内。
优点:转染效率高,可用于稳定转染和瞬时转染。
缺点:操作复杂,转染细胞数有限,多用于工程改造或转基因动物的胚胎细胞。
3.基因枪法
原理:利用压缩气体(如氦气或氮气)产生的高速气流,将带有DNA的微粒(如金粉)直接射入细胞内。
优点:可用于多种细胞类型的转染。
缺点:设备昂贵,操作复杂,且转染效率受多种因素影响。
二、化学转染法
1.磷酸钙共沉淀法
原理:利用磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞的原理,实现DNA的转染。
优点:操作简便。
缺点:重复性差,不可用于原代细胞的转染。
2.阳离子聚合物法
原理:利用阳离子聚合物(如聚乙亚胺PEI)与带负电的核酸磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞。
优点:适用宿主范围广,操作简便,细胞毒性小,转染效率高。
缺点:需进一步优化实验条件以提高转染效率。
3.阳离子脂质体法
原理:带正电的脂质体与带负电的核酸磷酸基团形成复合物,被细胞内吞从而实现转染。
优点:适用性广,转染效率高,重复性好。
缺点:转染时需除血清,转染效果随细胞类型变化大。
4.DEAE-右旋糖苷法
原理:带正电的DEAE-右旋糖苷与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞。
优点:方法相对简便,结果可重复。
缺点:对细胞有一定的毒副作用。
三、生物转染法
1.病毒介导法
原理:通过病毒侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中。
优点:转染效率高,细胞毒性低,适用于稳定转染,可用于难转染的细胞、原代细胞、体内细胞等。
缺点:准备程序复杂,构建病毒周期长,环节多,易出错,费用高,对细胞类型有很强的选择性。
细胞转染方式多种多样,每种方法都有其独特的优点和局限性。在选择转染方式时,需要根据实验目的、细胞类型、实验条件等多种因素进行综合考虑。