发布时间:2024-03-19 浏览次数:
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免疫组化(immunocytochemistry,IHC)可以用来确定组织细胞内的抗原,对其进行定位、定性及相对定量的研究。免疫组化在病理诊断上的应用是在上个世纪七十年代开始的,目前其在病理诊断中的应用非常广泛,其已是组织形态学研究中不可或缺的一部分。
简单来说,免疫组化就是一项利用抗原抗体反应来确定组织细胞内抗原和对蛋白定位、定性的实验技术。
由于免疫组化具有特异性强、灵敏度高、定位准确等特点,且能将形态研究与功能研究有机结合在一起,所以这门新技术已被广泛应用于生物学和医学研究的许多领域。
实验过程
包括切片制作、脱蜡、水化、抗原修复、非特定位点封闭、一抗孵育、二抗孵育、DAB显色、复染、封片、分析。
免疫组化染色法具体步骤为
1、常规制备涂片制备
2、TBS缓冲液洗涤5min*3次
3、第一抗体,4℃冰箱过夜
4、TBS缓冲液洗涤,5min*3次
5、第二 抗体,37℃,30min
6、TBS缓冲液洗涤,5min*3次。⑦ S-P复合物,37 ℃,30min
7、TBS洗涤液洗涤,5min*3次
8、DAB显色
9、流水洗涤
10、苏木素复染,酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。结果判定:细胞膜、胞浆或胞核内出现棕黄色颗粒为阳性(+);深棕色颗粒为强阳性(++);未显色者为阴性(-)