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细胞凋亡可以通过区分形态特征来鉴定。胞浆浓缩、膜起泡、染色质浓缩和核碎裂是典型的形态变化。TUNEL测定法通过对DNA片段化染色来鉴定凋亡性细胞。
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸(PS)位于细胞膜的胞浆侧。细胞发生早期凋亡后，PS外翻到胞膜侧，Annexin V对PS有高度亲和力，用FITC标记Annexin V，PS外翻的细胞由于结合Annexin V-FITC发出绿色荧光。凋亡晚期，细胞膜结构受损，碘化丙啶(PI)透过细胞膜进入细胞，细胞同时发出红色荧光和绿色荧光。同时检测Annexin V-FITC (绿色荧光)和PI(红色荧光)的信号，对早期凋亡和晚期凋亡的细胞比例进行分析。
实验流程
组织细胞或细胞培养物制成单细胞悬液→避光进行Annexin V-FITC、PI染色→终止染色→荧光显微镜观察拍照或流式细胞仪检测凋亡细胞→双阴性细胞为正常活细胞、绿色荧光单阳性细胞为早期凋亡细胞、红色荧光单阳性细胞为中晚期凋亡细胞、红色荧光单阳性细胞为机械性损伤细胞。
样品要求
鲜活组织或新鲜细胞培养物。
样品信息
细胞处理方式、染色类型等。
报告交付
实验所需试剂、仪器、实验方法、实验结果等。
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